血型正反定型操作步驟是什么
關(guān)鍵詞：
血型
血型正反定型操作步驟主要包括樣本采集、試劑準備、正向定型、反向定型、結(jié)果判讀五個環(huán)節(jié)。
1、樣本采集：
采集受檢者靜脈血2-3毫升置于抗凝管中，離心分離紅細胞與血清。紅細胞用生理鹽水洗滌3次配制成3%-5%懸液，血清需56℃水浴30分鐘滅活補體。操作需在生物安全柜中進行，避免樣本污染。
2、試劑準備：
準備抗A、抗B單克隆抗體試劑及A型、B型標準紅細胞。試劑需平衡至室溫，標準紅細胞需用生理鹽水洗滌后新鮮配制。檢查試劑有效期及外觀，出現(xiàn)沉淀或渾濁需更換。
3、正向定型：
在標記好的玻片或微孔板中分別加入抗A、抗B試劑各1滴，對應(yīng)加入受檢者紅細胞懸液1滴，混勻后室溫靜置10分鐘。1000rpm離心1分鐘觀察凝集反應(yīng)，出現(xiàn)顆粒狀凝集為陽性結(jié)果。
4、反向定型：
將受檢者血清與A型、B型標準紅細胞各1滴在玻片上混合，室溫靜置15分鐘后離心。血清中存在對應(yīng)抗體時會出現(xiàn)紅細胞凝集，如A型血清應(yīng)凝集B型紅細胞。
5、結(jié)果判讀：
正向定型顯示紅細胞抗原，反向定型驗證血清抗體，兩者結(jié)果需相互印證。出現(xiàn)不符時需重復試驗，必要時采用試管法或分子生物學方法復核。記錄凝集強度（1+至4+），最終出具規(guī)范報告。
操作全程需佩戴防護裝備，嚴格執(zhí)行無菌操作規(guī)范。實驗前后需用75%酒精擦拭臺面，廢棄標本需高壓滅菌處理。定期參加室間質(zhì)評保證檢測準確性，發(fā)現(xiàn)ABO亞型或特殊血型應(yīng)送上級實驗室確認。建議醫(yī)療機構(gòu)每季度對操作人員進行標準化培訓，確保血型鑒定結(jié)果可靠。
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